fa جداسازی و همسانه‌سازی ژن ureE هلیکوباکتر پیلوری در ناقل بیانی pIRES2-DSRed به‌منظور ایجاد واکسن ژنی ژنتيك پزشكي Medical Genetics مقاله اصیل پژوهشی Original Article <p dir="RTL" style="margin-right:42.55pt;"><strong>زمینه و هدف:</strong> هلیکوباکتر پیلوری به‌عنوان یکی از عوامل زخم معده و ایجادکننده سرطان معده قادر است با دارابودن آنزیم اوره‌آز، در محیط اسیدی معده سال‌ها زندگی کند. این آنزیم به‌منظور فعالیت کاتالیتیکی خود، به<span dir="LTR">Ni2+ </span>&nbsp;و گروهی از پروتئین‌های کمکی از جمله <em><span dir="LTR">ureE</span></em> نیازمند است. اوره‌آز نه‌تنها فاکتوری لازم برای کلنیزه‌شدن هلیکوباکتر پیلوری است، بلکه با مکانیزم‌های مختلفی باعث بیماری‌زایی می‌شود. با توجه به شیوع بالای این باکتری، یافتن راهی برای پیشگیری از وقوع عفونت ضروری به نظر می‌رسد<span dir="LTR">.</span> هدف از این مطالعه، همسانه‌سازی ژن <em><span dir="LTR">ureE</span></em> هلیکوباکتر پیلوری در ناقل بیانی <span dir="LTR">pIRES2-DSRed</span> به‌منظور ایجاد واکسن ژنی بود.</p> <p dir="RTL" style="margin-right:42.55pt;"><strong>روش تحقیق:</strong> در این مطالعه تجربی، ابتدا قطعه ژن <em><span dir="LTR">ureE</span></em> به روش <span dir="LTR">PCR</span> تکثیر گردید و با کلون‌سازی <span dir="LTR">T/A</span> درون وکتور <span dir="LTR">pTZ</span> کلون شد. ساب‌کلونینگ این ژن در وکتور <span dir="LTR">pIRES2-DSRed</span> با استفاده از آنزیم <span dir="LTR">T4</span>-لیگاز انجام شد و در باکتری <em><span dir="LTR">E.</span></em><span dir="LTR"> <em>coli</em></span> سویه <span dir="LTR">Tpo10F</span> ترانسفرم و تکثیر شد. سازواره حاصل که کاندیدای واکسن ژنی است، برای بررسی بیان ژن در سیستم یوکاریوتی، به روش الکتروپوریشن به سلول‌های <span dir="LTR">CHO</span> منتقل گردید. بررسی بیان ژن <em><span dir="LTR">ureE</span></em> در سلول‌های جانوری با <span dir="LTR">SDS-PAGE</span> مورد ارزیابی قرار گرفت.</p> <p dir="RTL" style="margin-right:42.55pt;"><strong>یافته‌ها:</strong> همسانه‌سازی ژن <em><span dir="LTR">ureE</span></em> در دو وکتور تکثیری <span dir="LTR">pTZ</span> و بیانی <span dir="LTR">pIRES2-DSRed</span>، با روش‌های <span dir="LTR">PCR</span>، هضم آنزیمی و تعیین توالی تأیید شد. نتایج <span dir="LTR">SDS-PAGE</span> مؤیّد بیان موفقیت‌آمیز ژن <em><span dir="LTR">ureE</span></em> در سیستم یوکاریوتی سلول‌های <span dir="LTR">CHO</span> بود.</p> <p dir="RTL" style="margin-right:42.55pt;"><strong>نتیجه‌گیری:</strong> سازواره ژنی نوترکیب <span dir="LTR">pIRES2-DSRed-<em>ureE</em></span> قادر به تولید موفق پلی‌پپتید حاصل از بیان ژن <em><span dir="LTR">ureE</span></em> هلیکوباکتر پیلوری در سلول‌های جانوی می‌باشد. با توجه به اینکه محصول پروتئینی ژن <em><span dir="LTR">ureE</span></em> یکی از پروتئین‌های مهم باکتری مذکور است، بنابراین می‌توان از سازواره ایجادشده در این مطالعه، به‌عنوان کاندیدای واکسن ژنی بر ضدّ هلیکوباکتر پیلوری در آینده استفاده کرد.</p> <p><strong>Background and Aim:</strong> As one of the factors of gastric ulcers and&nbsp;cancer, <em>Helicobacter pylori</em> can live in the acidic environment of stomach for many years due to having urease enzyme. This enzyme requires Ni2+ and a group of auxiliary proteins such as <em>ureE</em> for its catalytic activity. Urease is not only a requisite factor to colonize the <em>Helicobacter pylori</em> but it is also pathogenic with different mechanisms. Regarding the high prevalence of these bacteria finding a way to prevent infection with them&nbsp; is necessary. The present research aimed at homogenizing . cloning of <em>Helicobacter Pylori</em> <em>ureE</em> gene into pIRES2-DS Red expression vector in order to create a DNA (gene) vaccine.</p> <p><strong>Materials and Methods: </strong>In this experimental study, the <em>ureE</em> gene fragment was amplified through PCR method and it was cloned using T/A cloning in the pTZ vector. Sub-cloning of the gene was done in pIRES2-DS Red vector using T4-ligase enzyme and it was transformed into <em>E. coli</em> TOP10F strain; and, then, amplified. The gene construct, which is a DNA vaccine candidate, was transferred to CHO cells using electroporation method to investigate the gene expression in eukaryotic systems. <em>UreE</em> gene expression was assessed in eukaryotic cells by means of SDS-PAGE.</p> <p><strong>Results: </strong><em>UreE</em> gene cloning was confirmed in two vectors including pTZ as a replicative vector and pIRES2-DS Red expression vector by PCR, enzyme digestion, and sequencing methods. SDS-PAGE results confirmed the successful expression of the <em>ureE</em> gene in the eukaryotic system of CHO cells.</p> <p><strong>Conclusion: </strong>The recombinant pIRES2-DSRed-<em>ureE</em> construct is capable of successfully generating of polypeptides derived from <em>Helicobacter</em> <em>Pylori</em> <em>ureE</em> gene expression in bestial cells. Given that the protein product of the <em>ureE</em> gene is one of the most important proteins of the mentioned bacterium, . the created recombinant DNA in this research can be used as a DNA vaccine candidate against <em>Helicobacter</em> <em>pylori</em> in . future.</p> هلیکوباکتر پیلوری, ژن ureE, همسانه‌سازی, الکتروپوریشن Helicobacter pylori, ureE genes, Cloning, Electroporation 286 297 http://journal.bums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2017-1&slc_lang=fa&sid=1 Maryam Ghorbani مریم قربانی ghorbanim1003@gmail.com 8700319475328460027959 8700319475328460027959 Yes Department of Biology, Faculty of Basic Science, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran. گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران. Abbas Doosti عباس دوستی abbasdoosti@yahoo.com 8700319475328460027960 8700319475328460027960 No Biotechnology Research Center, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران.