fa اندازه گیری ثابت تمایل (افینیتی) آنتی بادی مونوکلونال IgG ضد آنزیم الکالین فسفاتاز با استفاده از روش الیزا ايمونولوژي Immunology مقاله اصیل پژوهشی Original Article زمینه و هدف: افینیتی آنتی بادی به آنتی ژن در بسیاری از موارد تاثیر بیولوژیکی مهمی در فعالیت آن آنتی بادی و همچنین در انجام سنجشهای آزمایشگاهی ایمونولوژیکی مانند رادیوایمونواسی (RIA) و ایمونوهیستوشیمی دارد. مطالعه حاضر با هدف سنجش افینیتی آنتی بادی مونوکلونال محصول کلون هیبریدومای A1G8F7 تولید شده نسبت به آنزیم آلکالین فسفاتاز (ALP) انجام گردید.روش بررسی: در این مطالعه تجربی، روشهای متعددی برای تعیین افینیتی و آویدیتی آنتی بادی تا کنون ابداع شده اند. در همه این روشها از سیستمی استفاده شده که در آن آنتی ژن و آنتی بادی با هم به تعادل برسند و آنگاه بدون تغییر دادن حالت تعادل، مقادیر آنتی ژن آزاد و آنتی ژن همراه شده با آنتی بادی سنجیده می شود. در این تحقیق از یک روش سریع الیزای رقابتی - که افینیتی آنتی بادی را در حالت محلول اندازه گیری می کند - برای سنجش میل پیوندی آنتی بادی مونوکلونال IgG ضد آلکالین فسفاتاز تولید شده از کلون A1G8F7 استفاده شد.یافته ها: غلظت ثابت آنتی بادی برای استفاده در الیزای اختصاصی مرحله دوم تعیین Dissociation Constant (Kd) به روش کلاتز، توسط یک الیزای رقابتی برابر 1&micro;g به دست آمد؛ با رسم نمودار کلاتز Kd کلون A1G8F7 برابر 3.8&times;10-9 تخمین زده شد.نتیجه گیری: با توجه به این که Kd آنتی بادی های طبیعی بدن برای بیشتر آنتی ژن ها بین 10-7 الی 10-11 متغیر است و با توجه به این که هر چه اندازه Kd کوچکتر باشد، افینیتی آنتی بادی بیشتر خواهد بود، آنتی بادی ترشحی از کلون A1G8F7 برای بیشتر سنجشهای ایمونولوژیکی مناسب به نظر می رسد. عملا در آزمایشهای ایمونوسیتوشیمی و ایمونوهیستوشیمی که با این آنتی بادی مونوکلونال - همراه با آنزیم ALP در لایه سوم - انجام گردید، نتیجه رنگ آمیزی بسیار عالی و قابل مقایسه با نمونه مشابه تجارتی APAAP) شرکت (Dako بود. <div style="text-align: justify;"><strong>Background and Aim</strong>: The affinity of an antibody with its antigen is a crucial parameter in its biological activity and carrying out immunologic tests such as radioimmunoassay (RIA) and immunohistochemistry. This study was done in our laboratory at Tarbiat Modarres University to measure the affinity constant of specific monoclonal antibodies/MAB (A1G8F7) with alkaline phosphatase enzyme produced.<br> <strong>Material and Methods</strong>: Several Methods have been innovated to determine the affinity and avidity of antibodies. In all of them a serum is used in which antigen and antibody would reach balance and, without a change in the balance, free antigen and antigen associated with antibody are measured. Applying a rapid and simple ELISA-based method the affinity constant of specific MAB (A1G8F7) against alkaline phosphatase was measured.<br> <strong>Results</strong>: Constant density of antibody for use in specific ELISA used to determine dissociation constant (Kd), applying klotz methodology-by means of a competitive ELISA proved to be 1&mu;g Kd of A1G8F7 clone; through klotz fig, it was estimated to be 3.8&times;10-9<br> <strong>Conclusion</strong>: considering that the Kd of natural antibodies in the body for most antigens ranges from 10-7 to 10-11 and that the less Kd the more affinity of the antibody, the antibody secreted by A1G8F7 clone seems suitable. Practically, in immunocytochemistry for most immunologic measuring, histochemistry test done with mAb-ALP enzyme in three line-staining led to pretty good and comparable results with the similar trade sample of APAAP (Dako, Denmark).</div> آنتی بادی مونوکلونال, افینیتی, آویدیتی, الیزا, آلکالین فسفاتاز Monoclonal antibody, Affinity avidity, ELISA, Alkaline phosphatase 9 15 http://journal.bums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-8&slc_lang=fa&sid=1 M. Naseri محسن ناصری naseri_m2003@yahoo.com 8700319475328460029445 8700319475328460029445 Yes Instructor, Department of Immunology, Faculty of Medicine, Birjand University of Medical Sciences, Birjand, Iran کارشناس ارشد ایمونولوژی؛ عضو هیأت علمی دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بیرجند SM. Moazzen سیدمحمد موذنی 8700319475328460029446 8700319475328460029446 No Associate Professor, Department of Immunology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modarres University, Tehran, Iran دانشیار گروه آموزشی ایمونولوژی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس تهران AA. Pourfathollah علی اکبر پورفتح اله 8700319475328460029447 8700319475328460029447 No Associate Professor, Department of Immunology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modarres University, Tehran, Iran دانشیار گروه آموزشی ایمونولوژی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس تهران B. Mesbahzadeh بهزاد مصباح زاده 8700319475328460029448 8700319475328460029448 No Instructor, Department of Physiology and Pharmacology, Faculty of Medicine, Birjand University of Medical Sciences, Birjand, Iran کارشناس ارشد فیزیولوژی؛ عضو هیأت علمی گروه آموزشی فیزیولوژی و فارماکولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بیرجند