fa پیشگیری از بیان ژن VEGFR-1 در محیط کشت، با استفاده از به‌کارگیری siRNA اختصاصی در درمان نئوواسکولاریزاسیون چشم چشم پزشكي Ophthalmology مقاله اصیل پژوهشی Original Article زمینه و هدف: آنژیوژنز، از مهمترین فرایندهای زیستی است که هر گونه اختلال در آن، به بیماری منجر می‌شود. نقطه اصلی در هدایت سیگنالینگ این فرایند، فاکتور رشد اندوتلیال عروقی است که از طریق رسپتورهایش اعمال اثر می‌کند. مطالعه حاضر، در جهت مهار بیان رسپتور تیپ І این فاکتور (VEGFR-1)، با استفاده از siRNA اختصاصی در محیط کشت، به منظور استفاده از تأثیر مهاری آن در درمان نئوواسکولاریزاسیون چشم صورت گرفته است. روش تحقیق: در این مطالعه تجربی، ابتدا با استفاده از توالی ژن هدف، توالی‌های siRNA اختصاصی، علیه آن طراحی، Blast و ساخته شد. از طرف دیگر، cDNA سلولHUVEC، سنتز و ژن هدف، با کمک پرایمر اختصاصیVEGFR1 و PCR، به میزان مورد نیاز تکثیر شد؛ سپس در وکتور بیانی PEFGP-N1، کلون و تأیید شد. پلاسمید ناقل حاصل، با استفاده از لیپوفکتامین، به سلول Hela که فاقد بیان ژن هدف بود، انتقال داده شد. میزان بیان GFRدر وکتور اولیه و وکتور کلون‌شده، در حضور و عدم حضور siRNA اختصاصی علیهVEGFR1 مورد ارزیابی قرار گرفت و میزان مهار ژن، از طریق ارزیابی کاهش فلورسانس سبز رنگ ناشی از GFP، وسترن بلات و RT-PCR مورد بررسی قرار گرفت. نتایج، با استفاده از آزمون تی‌تست، مورد آنالیز قرار گرفت و 05/0P< معنی‌دار در نظر گرفته شد. یافته‌ها: فلورسانت ناشی از اثر siRNA در گروه هدف در مقایسه با گروه کنترل کاهش داشت SDS Page و وسترن بلاتینگ از سلول حاوی وکتور مواجهه ‌یافته با هر دو نوع siRNA، کاهش میزان پروتئین را نشان داد. نتایج حاصل از دو siRNA به کاررفته، بیانگر کاهش بیان ژن در سطح رونویسی و ترجمه در مقایسه با گروه کنترل بود (05/0P<). نتیجه‌گیری: siRNA اختصاصی طراحی‌شده علیه VEGFR-1، با استفاده از لیپوفکتامین، به طور مناسب به داخل سلول منتقل و از بیان رسپتور، به طور معنی‌دار جلوگیری نمود؛ لذا احتمالاً به عنوان یک فاکتور مناسب درمانی جدید، در جلوگیری و یا کاهش نئوواسکولاریزاسیون در چشم، مطرح باشد. Background and Aim: Angiogenesis is one of important biological processes any disruption in which leads to disease. The main signaling factor in this process is VEGF which acts through its receptors. The present study was done in order to inhibit the expression of receptor type1of this factor (VEGFR-1) using specific siRNA in the culture medium to use its inhibitory effect on neovascularization in the eye. Materials and Methods: In this experimental study first, using target gene sequences, sequences of the specific siRNA were designed against them blasted and manufactured. On the other hand, cDNA of HUVEC cell was synthesized and PCR, with specific primers for target gene, was reproduced as necessary. Then, PEFGP-N1 expression vectors were cloned and confirmed. Then, the obtained plasmid vector was transferred to Hela cells lacking target expressive genes through lipofectamin. GFR expression rate in the initial vector and in the cloned one, both in presence and in absence of specific VEGFR1 siRNA, was assessed. Evaluation of gene inhibition was carried out through decreasing of green fluorescence from GFR, Western blot and RT-PCR. Results were analyzed using T-test and P<0.05 was taken as the significant level. Results: The fluorescence emission from defined siRNA decreased compared to control group. SDS pages and blots from vector cloned cells exposed to both siRNA showed reduced protein expression The outcome of applying two siRNA indicates gene expression in the form of transcription and translation, compared to the control group (P<0.05). Conclusion: Specifically designed siRNA against VEGFR1, through lipofectamin, was appropriately transferred into cell and significantly prevented from the receptor expression. In fact, by blocking angiogenesis signaling route, it was able to prevent neovascurization. Thus, this can be made use of as an appropriate factor in preventing or decreasing neovascularization in the eye. VEGFR-1, siRNA, نئوواسکولاریزاسیون, HUVEC, RT-PCR VEGFR-1, siRNA Neovascularization, HUVEC, RT-PCR 255 265 http://journal.bums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-736-1&slc_lang=fa&sid=1 Ali Zarei Mahmud abadi علی زارعی محمودآبادی 8700319475328460029356 8700319475328460029356 No Biochemistry Department& Chemical Damage Research Center, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran. گروه بیوشیمی و مرکز تحقیقات آسیب‌های شیمیایی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران. Masoomeh Masoomi Karimi معصومه معصومی کریمی 8700319475328460029357 8700319475328460029357 No , Immunology Department, torbateheydariyeh university of medical science. Torbateheydariyeh, Iran گروه ایمونولوژی، دانشگاه علوم پزشکی تربت حیدریه، تریت حیدریه، ایران. Majid Bahabadi مجید بهابادی 8700319475328460029358 8700319475328460029358 No Biochemistry Department, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran گروه بیوشیمی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران. Mahdi Kamali مهدی کمالی 8700319475328460029359 8700319475328460029359 No Nano-biotechnology Research Center, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران. Reza Kushki رضا کوشکی 8700319475328460029360 8700319475328460029360 No Nano-biotechnology Research Center, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران. Fariba Khalili فریبا خلیلی 8700319475328460029361 8700319475328460029361 No Nano-biotechnology Research Center, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران. Nima Farhadi نیما فرهادی 8700319475328460029362 8700319475328460029362 No Nano-biotechnology Research Center, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران. Mostafa Naderi مصطفی نادری 8700319475328460029363 8700319475328460029363 No Department of Ophthalmology, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran. گروه چشم پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران Saman sajadi سامان سجادی 8700319475328460029364 8700319475328460029364 No Nano-biotechnology Research Center, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران. Moslem Jafari Sani مسلم جعفری ثانی moslem.jafarisani@gmail.com 8700319475328460029365 8700319475328460029365 Yes biochemistry department, torbateheydariyeh university of medical science. Torbateheydariyeh, Iran گروه بیوشیمی بالینی، دانشگاه علوم پزشکی تربت حیدریه، تریت حیدریه، ایران. Javad Alizadeh جواد علیزاده 8700319475328460029366 8700319475328460029366 No Nano-biotechnology Research Center, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران.