Journal of Birjand University of Medical Sciences
مجله علمي دانشگاه علوم پزشكي بيرجند
J Birjand Univ Med Sci
Medical Sciences
http://journal.bums.ac.ir
87
journal87
1607-2197
2423-6152
fa
jalali
1391
9
1
gregorian
2012
12
1
19
3
online
1
fulltext
fa
پیشگیری از بیان ژن VEGFR-1 در محیط کشت، با استفاده از بهکارگیری siRNA اختصاصی در درمان نئوواسکولاریزاسیون چشم
Preventing the expression of VEGFR-1 in culture medium using specific SiRNA - as a potential therapeutic method in eye neovascularization
چشم پزشكي
Ophthalmology
مقاله اصیل پژوهشی
Original Article
زمینه و هدف: آنژیوژنز، از مهمترین فرایندهای زیستی است که هر گونه اختلال در آن، به بیماری منجر میشود. نقطه اصلی در هدایت سیگنالینگ این فرایند، فاکتور رشد اندوتلیال عروقی است که از طریق رسپتورهایش اعمال اثر میکند. مطالعه حاضر، در جهت مهار بیان رسپتور تیپ І این فاکتور (VEGFR-1)، با استفاده از siRNA اختصاصی در محیط کشت، به منظور استفاده از تأثیر مهاری آن در درمان نئوواسکولاریزاسیون چشم صورت گرفته است. روش تحقیق: در این مطالعه تجربی، ابتدا با استفاده از توالی ژن هدف، توالیهای siRNA اختصاصی، علیه آن طراحی، Blast و ساخته شد. از طرف دیگر، cDNA سلولHUVEC، سنتز و ژن هدف، با کمک پرایمر اختصاصیVEGFR1 و PCR، به میزان مورد نیاز تکثیر شد؛ سپس در وکتور بیانی PEFGP-N1، کلون و تأیید شد. پلاسمید ناقل حاصل، با استفاده از لیپوفکتامین، به سلول Hela که فاقد بیان ژن هدف بود، انتقال داده شد. میزان بیان GFRدر وکتور اولیه و وکتور کلونشده، در حضور و عدم حضور siRNA اختصاصی علیهVEGFR1 مورد ارزیابی قرار گرفت و میزان مهار ژن، از طریق ارزیابی کاهش فلورسانس سبز رنگ ناشی از GFP، وسترن بلات و RT-PCR مورد بررسی قرار گرفت. نتایج، با استفاده از آزمون تیتست، مورد آنالیز قرار گرفت و 05/0P< معنیدار در نظر گرفته شد. یافتهها: فلورسانت ناشی از اثر siRNA در گروه هدف در مقایسه با گروه کنترل کاهش داشت SDS Page و وسترن بلاتینگ از سلول حاوی وکتور مواجهه یافته با هر دو نوع siRNA، کاهش میزان پروتئین را نشان داد. نتایج حاصل از دو siRNA به کاررفته، بیانگر کاهش بیان ژن در سطح رونویسی و ترجمه در مقایسه با گروه کنترل بود (05/0P<). نتیجهگیری: siRNA اختصاصی طراحیشده علیه VEGFR-1، با استفاده از لیپوفکتامین، به طور مناسب به داخل سلول منتقل و از بیان رسپتور، به طور معنیدار جلوگیری نمود؛ لذا احتمالاً به عنوان یک فاکتور مناسب درمانی جدید، در جلوگیری و یا کاهش نئوواسکولاریزاسیون در چشم، مطرح باشد.
Background and Aim: Angiogenesis is one of important biological processes any disruption in which leads to disease. The main signaling factor in this process is VEGF which acts through its receptors. The present study was done in order to inhibit the expression of receptor type1of this factor (VEGFR-1) using specific siRNA in the culture medium to use its inhibitory effect on neovascularization in the eye. Materials and Methods: In this experimental study first, using target gene sequences, sequences of the specific siRNA were designed against them blasted and manufactured. On the other hand, cDNA of HUVEC cell was synthesized and PCR, with specific primers for target gene, was reproduced as necessary. Then, PEFGP-N1 expression vectors were cloned and confirmed. Then, the obtained plasmid vector was transferred to Hela cells lacking target expressive genes through lipofectamin. GFR expression rate in the initial vector and in the cloned one, both in presence and in absence of specific VEGFR1 siRNA, was assessed. Evaluation of gene inhibition was carried out through decreasing of green fluorescence from GFR, Western blot and RT-PCR. Results were analyzed using T-test and P<0.05 was taken as the significant level. Results: The fluorescence emission from defined siRNA decreased compared to control group. SDS pages and blots from vector cloned cells exposed to both siRNA showed reduced protein expression The outcome of applying two siRNA indicates gene expression in the form of transcription and translation, compared to the control group (P<0.05). Conclusion: Specifically designed siRNA against VEGFR1, through lipofectamin, was appropriately transferred into cell and significantly prevented from the receptor expression. In fact, by blocking angiogenesis signaling route, it was able to prevent neovascurization. Thus, this can be made use of as an appropriate factor in preventing or decreasing neovascularization in the eye.
VEGFR-1, siRNA, نئوواسکولاریزاسیون, HUVEC, RT-PCR
VEGFR-1, siRNA Neovascularization, HUVEC, RT-PCR
255
265
http://journal.bums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-736-1&slc_lang=fa&sid=1
Ali
Zarei Mahmud abadi
علی
زارعی محمودآبادی
8700319475328460029356
8700319475328460029356
No
Biochemistry Department& Chemical Damage Research Center, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran.
گروه بیوشیمی و مرکز تحقیقات آسیبهای شیمیایی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران.
Masoomeh
Masoomi Karimi
معصومه
معصومی کریمی
8700319475328460029357
8700319475328460029357
No
, Immunology Department, torbateheydariyeh university of medical science. Torbateheydariyeh, Iran
گروه ایمونولوژی، دانشگاه علوم پزشکی تربت حیدریه، تریت حیدریه، ایران.
Majid
Bahabadi
مجید
بهابادی
8700319475328460029358
8700319475328460029358
No
Biochemistry Department, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran
گروه بیوشیمی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران.
Mahdi
Kamali
مهدی
کمالی
8700319475328460029359
8700319475328460029359
No
Nano-biotechnology Research Center, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran
مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران.
Reza
Kushki
رضا
کوشکی
8700319475328460029360
8700319475328460029360
No
Nano-biotechnology Research Center, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran.
مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران.
Fariba
Khalili
فریبا
خلیلی
8700319475328460029361
8700319475328460029361
No
Nano-biotechnology Research Center, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran.
مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران.
Nima
Farhadi
نیما
فرهادی
8700319475328460029362
8700319475328460029362
No
Nano-biotechnology Research Center, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran.
مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران.
Mostafa
Naderi
مصطفی
نادری
8700319475328460029363
8700319475328460029363
No
Department of Ophthalmology, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran.
گروه چشم پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران
Saman
sajadi
سامان
سجادی
8700319475328460029364
8700319475328460029364
No
Nano-biotechnology Research Center, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran
مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران.
Moslem
Jafari Sani
مسلم
جعفری ثانی
moslem.jafarisani@gmail.com
8700319475328460029365
8700319475328460029365
Yes
biochemistry department, torbateheydariyeh university of medical science. Torbateheydariyeh, Iran
گروه بیوشیمی بالینی، دانشگاه علوم پزشکی تربت حیدریه، تریت حیدریه، ایران.
Javad
Alizadeh
جواد
علیزاده
8700319475328460029366
8700319475328460029366
No
Nano-biotechnology Research Center, Baghiyatallah University of Medical Science, Tehran, Iran.
مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران.