دوره 19، شماره 3 - ( پاييز 1391 )                   جلد 19 شماره 3 صفحات 255-265 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


1- گروه بیوشیمی و مرکز تحقیقات آسیب‌های شیمیایی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران.
2- گروه ایمونولوژی، دانشگاه علوم پزشکی تربت حیدریه، تریت حیدریه، ایران.
3- گروه بیوشیمی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران.
4- مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران.
5- گروه چشم پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران
6- گروه بیوشیمی بالینی، دانشگاه علوم پزشکی تربت حیدریه، تریت حیدریه، ایران. ، moslem.jafarisani@gmail.com
چکیده:   (13965 مشاهده)
زمینه و هدف: آنژیوژنز، از مهمترین فرایندهای زیستی است که هر گونه اختلال در آن، به بیماری منجر می‌شود. نقطه اصلی در هدایت سیگنالینگ این فرایند، فاکتور رشد اندوتلیال عروقی است که از طریق رسپتورهایش اعمال اثر می‌کند. مطالعه حاضر، در جهت مهار بیان رسپتور تیپ І این فاکتور (VEGFR-1)، با استفاده از siRNA اختصاصی در محیط کشت، به منظور استفاده از تأثیر مهاری آن در درمان نئوواسکولاریزاسیون چشم صورت گرفته است. روش تحقیق: در این مطالعه تجربی، ابتدا با استفاده از توالی ژن هدف، توالی‌های siRNA اختصاصی، علیه آن طراحی، Blast و ساخته شد. از طرف دیگر، cDNA سلولHUVEC، سنتز و ژن هدف، با کمک پرایمر اختصاصیVEGFR1 و PCR، به میزان مورد نیاز تکثیر شد؛ سپس در وکتور بیانی PEFGP-N1، کلون و تأیید شد. پلاسمید ناقل حاصل، با استفاده از لیپوفکتامین، به سلول Hela که فاقد بیان ژن هدف بود، انتقال داده شد. میزان بیان GFRدر وکتور اولیه و وکتور کلون‌شده، در حضور و عدم حضور siRNA اختصاصی علیهVEGFR1 مورد ارزیابی قرار گرفت و میزان مهار ژن، از طریق ارزیابی کاهش فلورسانس سبز رنگ ناشی از GFP، وسترن بلات و RT-PCR مورد بررسی قرار گرفت. نتایج، با استفاده از آزمون تی‌تست، مورد آنالیز قرار گرفت و 05/0P< معنی‌دار در نظر گرفته شد. یافته‌ها: فلورسانت ناشی از اثر siRNA در گروه هدف در مقایسه با گروه کنترل کاهش داشت SDS Page و وسترن بلاتینگ از سلول حاوی وکتور مواجهه ‌یافته با هر دو نوع siRNA، کاهش میزان پروتئین را نشان داد. نتایج حاصل از دو siRNA به کاررفته، بیانگر کاهش بیان ژن در سطح رونویسی و ترجمه در مقایسه با گروه کنترل بود (05/0P<). نتیجه‌گیری: siRNA اختصاصی طراحی‌شده علیه VEGFR-1، با استفاده از لیپوفکتامین، به طور مناسب به داخل سلول منتقل و از بیان رسپتور، به طور معنی‌دار جلوگیری نمود؛ لذا احتمالاً به عنوان یک فاکتور مناسب درمانی جدید، در جلوگیری و یا کاهش نئوواسکولاریزاسیون در چشم، مطرح باشد.
واژه‌های کلیدی: VEGFR-1، siRNA، نئوواسکولاریزاسیون، HUVEC، RT-PCR
متن کامل [PDF 585 kb]   (3181 دریافت)    
نوع مطالعه: مقاله اصیل پژوهشی | موضوع مقاله: چشم پزشكي
دریافت: ۱۳۹۰/۱۲/۱۴ | پذیرش: ۱۳۹۱/۸/۱۰ | انتشار: ۱۳۹۴/۱۲/۲۰